Fracture in Irradiated Rat Femur: A Description of an Experimental Model and Evaluation of its Effectiveness / Fratura em fêmur irradiado de rato: Descrição de um modelo experimental e avaliação de sua eficácia

Abstract Objective We aim to describe an experimental model for studying femoral fractures in rats after exposure to ionizing radiation, demonstrating a way to apply a substance for analysis, the method for patterning fracture and irradiation, and how to evaluate its effectiveness based on radiographic studies. Methods We used 24 rats divided into 2 groups of 12 animals each. The STUDY group was exposed to ionizing radiation and treated with saline solution, and the CONTROL group was not exposed to radiation and was treated with saline solution. All animals were subjected to standardized fracture of the right femur that was fixed with intramedullary wire. The efficiency of the bone union was assessed by radiographic exam. Results Fracture healing was more efficient in bones not exposed to ionizing radiation (p = 0.012). All fractures met the criteria of being simple, diaphyseal, transverse or short oblique. Conclusion The experimental model presented is an efficient alternative for the study of fractures in irradiated bones in rats.

Resumo Objetivo Nosso objetivo é descrever um modelo experimental para estudo de fraturas de fêmur em ratos após exposição a radiação ionizante, demonstrando uma forma de aplicação de uma substância para análise, o método de padronização de fratura e irradiação e a forma de avaliação de sua eficácia com base em estudos radiográficos. Métodos Utilizamos 24 ratos divididos em dois grupos de 12 animais cada. O grupo ESTUDO foi exposto à radiação ionizante e tratado com soro fisiológico, enquanto o grupo CONTROLE não foi exposto à radiação e foi tratado com soro fisiológico. Todos os animais foram submetidos à fratura padronizada do fêmur direito e sua fixação com fio intramedular. A eficácia da consolidação óssea foi determinada por exame radiográfico. Resultados A cicatrização de fraturas foi mais eficiente em ossos não expostos à radiação ionizante (p = 0,012). Todas as fraturas atenderam aos critérios de serem simples, diafisárias, transversas ou oblíquas curtas. Conclusão O modelo experimental apresentado é uma boa alternativa para o estudo de fraturas em ossos irradiados em ratos.

Different roles of helper T lymphocytes during dendritic cells vaccine in experimental breast cancer

Breast cancer is the most common women’s tumor. Treatments though effective, are often aggressive and leave the patients vulnerable to developing opportunistic infections. There is a need for less aggressive more effective new therapies. In this study, we have made an attempt to evaluate DCs immunotherapy by flow cytometry, analyzing the presence of infiltrating cells, cytokines and transcription factors in the spleens, lymph nodes and tumors of breast cancer mice undergoing immunotherapy. The 4T1 cell transfection was used to induce breast cancer in Balb/c mice aged 6 to 8 weeks. Mice were treated with 3 doses of DCs vaccine. After the treatment, animals were euthanized, the spleen, lymphnodes and tumors were removed and used to perform flow cytometry. Results have shown higher CD4+ T lymphocytes that produce IL-12 in the spleen of group treated with DCs vaccine (149,8-271,3) 172,4. Further, there was an increase in T-bet (976,1-1075) 1022 in the lymph nodes of tumor group treated with DCs and less FOXP3 (795,7 - 895) 832. Tumoral volume and the FOXP3 were decreased in the treated group. There was an increase in the transcription factor of Th1 profile, and of cytotoxic T lymphocytes, inferring a good immune response. With these observations, it can be concluded that the DC vaccine is effective in combating the development of tumors.

Pathways of IFN-alpha Activation in Patients with Cervical Intraepithelial Neoplasia (CIN) / Vias de ativação de IFN-alfa em pacientes com Neoplasia Intraepitelial Cervical (NIC)

Abstract Objective The aim of the present study was to compare the local and systemic expression of the factors linked to the interferon alpha (IFN-α) activation pathway in different degrees of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) and cervical cancer. Methods A total of 128 patients with CIN I, CIN II, CIN III and cervical cancer was evaluated. The real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) technique was used to evaluate the gene expression of IFNR1, IFNR2, IFN-α, oligoadenylate synthase (2'5′OAS), cytokine signal suppressor 1 (SOCS) 1, SOCS3, signal transducer and transcription activator 1 (STAT1), and IRF9 from 128 biopsies. A total of 46 out of 128 samples were evaluated by flow cytometry for IFNAR1, IFNAR2, STAT1, IRF7 and IFN-α in peripheral blood cells. Results Patients with CIN II and III (63 samples) had a low local expression of IFNR1, but not IFNR2. Patients with some degree of injury showed high expression of SOCS1 and SOCS3. Systemically, patients with CIN II and III (20 samples) had a significant increase in IFNR1, IFNR2, STAT1, IRF7, and IFN-α in helper, cytotoxic T lymphocytes, and in monocytes. Conclusion Patients with high-grade lesions have increased systemic expression of IFN-α and its activation pathways in helper and cytotoxic T lymphocytes, as well as in monocytes due to an exacerbation of the immune response in these patients. This phenomenon is not accompanied by resolution of the lesion due to a defect in the IFN-α activation pathway that revealed by low local IFNAR1 expression and high local expression of SOCS1 and SOCS3.

Resumo Objetivo O objetivo do presente estudo foi comparar a expressão local e sistêmica dos fatores ligados à via de ativação do interferon alfa (IFN-α) em diferentes graus de neoplasia intraepitelial cervical (NIC) e câncer cervical (CA) Métodos Foram avaliados 128 pacientes com NIC I, NIC II, NIC III e CA. A técnica de reação de cadeia de polimerase em tempo real (RT-PCR, na sigla em inglês) foi realizada para avaliar a expressão gênica do receptor de interferon (IFNR) 1, IFNR2, IFN-α, 2′-5′- oligoadenilato sintetase (2′5′OAS), supressor de sinalização de citocina (SOCS)1, SOCS3, transdutor de sinal e ativador de transcrição 1 (STAT1) e fator regulador de interferon 9 (IRF9) das 128 biópsias. Das 128 amostras, 46 foram avaliadas por citometria de fluxo para IFNAR1, IFNAR2, STAT1, IRF7 e IFN-α em células de sangue periférico. Resultados Pacientes com NIC II e III (63 amostras) tiveram baixa expressão local de IFNR1 mas não de IFNR2. Pacientes com algum grau de lesão apresentaram alta expressão de SOCS1 e SOCS3. Sistemicamente, os pacientes com NIC II e III (20 amostras) tiveram um aumento significativo de IFNR1, IFNR2, STAT1, IRF7 e IFN-α em linfócitos T auxiliares, citotóxicos e monócitos. Conclusão Pacientes com lesões de alto grau apresentam expressão sistêmica aumentada de IFN-α e suas vias de ativação em linfócitos T auxiliares e citotóxicos, bem como em monócitos, devido à exacerbação da resposta imune nesses pacientes. Este fenômeno não é acompanhado pela resolução da lesão devido a um defeito na via de ativação do IFN-α que é revelado pela baixa expressão local de IFNR1 e alta expressão local de SOCS1 e SOCS3.

Interferon-α action in cytokine profile in eosinophilic nasal polyp cultures / Ação do interferon-α sobre o perfil de citocinas em culturas de pólipos nasais eosinofílicos

Abstract Introduction Chronic rhinosinusitis is currently classified into two types: chronic rhinosinusitis without nasal polyps and chronic rhinosinusitis with nasal polyps. In the West, approximately 80% of chronic rhinosinusitis with nasal polyps cases are characterized by a predominantly eosinophilic cell infiltrate and a Th2 cytokine pattern. Objective To evaluate the effect of Interferon-α on cytokine levels of the eosinophilic nasal polyp cell culture supernatant. Methods Cell cultures were performed based on nasal polypoid tissue samples collected from 13 patients with eosinophilic chronic rhinosinusitis with nasal polyps. Polyps were considered eosinophilic according to the histopathological examination. Cell cultures were stimulated with 3000 IU of interferon-α. Before and after the stimulus, concentrations of Interferon-γ, tumor necrosis factor αand IL 2, 4, 6 and 10, using cytometric bead array, were assessed. Results Cell samples from eosinophilic nasal polyps from 13 patients were included in the study. Twenty-four hours after interferon-α stimulation, eosinophilic nasal polyp culture supernatants showed significantly decreased IL-4 concentrations and increase in interferon-γ, IL-10 and IL-6 concentrations compared to controls. There were no significant differences in tumor necrosis factor -α and IL-2 concentrations. Conclusion We demonstrated that interferon-α in vitro alters the pattern of cytokines in cell cultures of eosinophilic nasal polyps. Analysis of these alterations suggests that interferon-α promotes a rebalancing of inflammatory profiles in cell cultures, favoring the expression of Th1 and regulatory cytokines over Th2 cytokines.

Resumo Introdução A rinossinusite crônica, atualmente, é classificada em dois tipos: Rinossinusite Crônica sem Pólipos Nasais (RSCsPN) e Rinossinusite Crônica com Pólipos Nasais (RSCcPN). No Ocidente, cerca de 80% dos casos de RSCcPN caracterizam-se por um infiltrado celular predominantemente eosinofílico e um padrão de citocinas Th2. Objetivo Avaliar o efeito do Interferon-alpha nos níveis de citocinas do sobrenadante de culturas celulares de pólipos nasais eosinofílicos. Método Foram feitas culturas celulares a partir de amostras de tecido polipoide nasal coletadas de 13 pacientes com RSCcPN eosinofílica. Os pólipos eram considerados eosinofílicos segundo exame histopatológico. As culturas celulares foram estimuladas com 3000 UI de IFN-α. Antes e após tal estímulo, foram avaliadas, no sobrenadante das culturas celulares, as concentrações do Interferon-γ (IFN-γ), do Fator de Necrose Tumoral alfa (TNF-α) e das Interleucinas (IL) 2, 4, 6 e 10, usou-se o Cytometric Bead Array. Resultados Foram incluídas no estudo amostras celulares dos pólipos nasais eosinofílicos de 13 pacientes. Vinte e quatro horas após o estímulo com IFN-α, os sobrenadantes das culturas dos pólipos nasais eosinofílicos apresentaram, de forma significante, diminuição da concentração de IL-4 e aumento das concentrações de IFN-γ, IL-10 e IL-6, em relação ao controle. Não houve diferença significante nas concentrações de TNF-α e IL-2. Conclusão Demonstramos que o IFN-α, in vitro, altera o padrão de citocinas nas culturas celulares de pólipos nasais eosinofílicos. A análise do conjunto dessas alterações sugere que o IFN-α promove, nas culturas celulares, um rebalanceamento dos perfis inflamatórios, favorece a expressão de citocinas Th1 e regulatórias, em detrimento de citocinas do padrão Th2.

Immunological Characteristics between αß TDC and γδ TDC Cells in the Spleen of Breast Cancer-Induced Mice / Características imunológicas entre células TDC αß e TDC γδ no baço de camundongos com câncer de mama induzido

Abstract Objective To evaluate the antitumoral role of γδ TDC cells and αβ TDC cells in an experimental model of breast cancer. Methods Thirty female Balb/c mice were divided into 2 groups: control group (n=15) and induced-4T1 group (n=15), in which the mice received 2 x 105 4T1 mammary tumor cell line. Following the 28-day experimental period, immune cells were collected from the spleen and analyzed by flow cytometry for comparison of αβ TDC (TCRαβ+ CD11c+MHCII+) and γδ TDC (TCRγδ+CD11c+MHCII+) cells regarding surface markers (CD4+ and C8+) and cytokines (IFN-γ, TNF-α, IL-12 and IL-17). Results A total of 26.53% of γδ TDC- control group (p<0.0001) - the proportion of αβ TDC was lower in splenic cells than γδ TDC; however, these 2 cell types were reduced in tumor conditions (p<0.0001), and the proportion of IFN-γ, TNF-α, IL-12 and IL-17 cytokines produced by γδ TDC was higher than those produced by αβ TDC, but it decreased under conditions of tumor-related immune system response (p<0.0001). Conclusion Healthy mice engrafted with malignant cells 4T1 breast tumor presented TDC with γδ TCR repertoire. These cells express cytotoxic molecules of lymphocytes T, producing anti-tumor proinflammatory cytokines.

Resumo Objetivo Esclarecer o possível papel antitumoral das células TDC γδ e TDC αβ em um modelo experimental de câncer de mama. Métodos Trinta baços de camundongos Balb/c analisados por citometria de fluxo, separados entre grupo controle (n=15) e o grupo tumoral induzido por 4T1 (n=15). Resultados Presença de 26,53% de TDC γδ nos camundongos do grupo controle (p<0,0001), proporção de TDC αβ menor em células esplênicas do que TDC γδ; no entanto, estes dois tipos de células são reduzidos emcondições tumorais (p<0,0001), e a proporção de citocinas IFN-γ, TNF-α, IL-12 e IL-17 produzidas pelas célula TDC γδ foi maior do que as produzidas pelas células TDC αβ, mas foram diminuídas sob condições de resposta ao sistema imunológico relacionada ao tumor (p<0,0001). Conclusão Camundongos saudáveis induzidos ao tumor de mama 4T1 apresentaram TDC com repertório TCR γδ. Estas células expressam moléculas citotóxicas de linfócitos T, produzindo citocinas proinflamatórias anti-tumor.

The Short Physical Performance Battery is a discrimi-native tool for identifying low quality of life in gynecological postmenopausal cancer survivor / O Short Physical Performance Battery é uma ferramenta discriminativa para identificar baixa qualidade de vida em mulheres na pós-menopausa sobreviventes do câncer ginecológico

Adverse events due to cancer treatment (changes in weight, reduced muscle capacity and mobility) hinder the quality of life (QoL) of cancer survivors. Nevertheless, the identification of discriminative predictors of QoL in post-menopausal women (PW) survivors of gynecological cancer (PW-SGC) has been ignored. Objective: The purpose of the present study was to examine the role of muscle capacity, mobility and body mass index (BMI) on the deterioration of QoL in PW (n=35; 62.1±8.2 years) and PW-SGC (n=51; 60.8±11.4 years). Methods: The QoL questionnaire (SF-36), anthropometrical evaluation (BMI), hand-held dynamometry (HHD) and short physical performance battery (SPPB) were applied in all volunteers. Results: The participants had overweight, low SF-36 scores and normal HHD, and no significant differences were found between both groups, however the SPPB score was higher in the PW group (p<0.001). Linear regression analyses for QoL indicated the BMI (beta=-0.27) and the SPPB (beta=0.57) were the strongest and most significant predictors in PW and PW-SGC, respectively. The area under the curve (AUC) for the SPPB score was 0.74 (95% CI: 0.57-0.87; P=0.015) in the PW-SGC group and 0.62 (95% CI: 0.47-0.75; P = 0.181) in PW. Conclusion: The present study showed that the importance of BMI and mobility (SPPB) for QoL differ between PW and PW-SGC. For PW-SGC, the strongest independent predictor of QoL was mobility (SPPB), whereas BMI was the strongest contributor in PW. Moreover, the SPPB test is a discriminative predictor (or assessment tool) for identifying the low quality of life in postmenopausal women survivors of gynecological cancer.

Efeitos adversos do tratamento (modificações da massa corporal e reduções da capacidade muscular e mobilidade) podem modificar a qualidade de vida (QV) de sobreviventes de câncer. Semelhantemente, a menopausa e o envelhecimento podem promover alterações antropométricas e da função física. Portanto, torna-se necessário o levantamento de ferramentas para predizer, distintamente, a QV em mulheres na pós menopausa (PM) e em mulheres na pós menopausa sobreviventes de câncer ginecológico (PMSCG). Objetivo: Examinar a contribuição da força, mobilidade e do índice de massa corporal (IMC) sobre as alterações da QV em PM (n = 35; 62,1±8,2 anos) e PMSCG (n = 51; 60,8±11,4 anos). Métodos: Aplicou-se questionário de QV (SF-36), avaliação antropométrica (IMC), dinamometria de preensão manual (DPM) e short physical performance battery (SPPB). Resultados: Participantes apresentaram sobrepeso, baixo score em SF36 e DPM normal, sem diferenças entre os grupos. O score de SPPB foi maior em PM (p<0,001). Análise de regressão linear de QV, indicou IMC (beta = -0,27) e o SPPB (beta = 0,57), como os mais fortes preditores em PM e PMSCG, respectivamente. A área sob a curva para o score do SPPB foi 0,74 (95% CI: 0,57-0.87; P = 0,015) em PMSCG e 0,62 (95% CI: 0,47-0,75; P = 0,181) em PM. Conclusão: O presente estudo demonstrou que para PMSCG o principal preditor da QV foi a mobilidade (SPPB), enquanto o IMC foi o mais forte contribuidor em PM. Portanto, o SPPB é um teste específico para identificar reduções na QV pacientes sobreviventes de câncer ginecológico.

Loss of Ovarian Function Results in Increased Loss of Skeletal Muscle in Arthritic Rats / Perda da função ovariana resulta em perda de músculo esquelético aumentada em ratos artríticos

Objective We studied the effects of loss of ovarian function (ovariectomy) onmuscle mass of gastrocnemius and themRNA levels of IGF-1, atrogin-1, MuRF-1, andmyostatin in an experimental model of rheumatoid arthritis in rats. Methods We randomly allocated 24 female Wistar rats (9 weeks, 195.3±17.4 grams) into four groups: control (CT-Sham; n = 6); rheumatoid arthritis (RA; n = 6); ovariectomy without rheumatoid arthritis (OV; n = 6); ovariectomy with rheumatoid arthritis (RAOV; n = 6). We performed the ovariectomy (OV and RAOV) or Sham (CTSham or RA) procedures at the same time, fifteen days before the rheumatoid arthritis induction. The RA and RAOV groups were immunized and then were injected with Met- BSA in the tibiotarsal joint. After 15 days of intra-articular injections the animals were euthanized. We evaluated the external manifestations of rheumatoid arthritis (perimeter joint) as well as animal weight, and food intake throughout the study. We also analyzed the cross-sectional areas (CSA) of gastrocnemius muscle fibers in 200 fibers (H&E method). In the gastrocnemius muscle, we analyzed mRNA expression by quantitative real time PCR followed by the Livak method (ΔΔCT). Results The rheumatoid arthritis induced reduction in CSA of gastrocnemius muscle fibers. The RAOV group showed a lower CSA of gastrocnemius muscle fibers compared to RA and CT-Sham groups. Skeletal muscle IGF-1 mRNA increased in arthritics and ovariectomized rats. The increased IGF-1 mRNA was higher in OV groups than in the RA and RAOV groups. Antrogin-1 mRNA also increased in the gastrocnemius muscle of arthritic and ovariectomized rats. However, the increased atrogin-1 mRNA was higher in RAOV groups than in the RA and OV groups. Gastrocnemius muscle MuRF-1 mRNA increased in the OVand RAOVgroups, but not in the RA and Shamgroups. However, the RAOV group showed higher MuRF-1 mRNA than the OV group. The myostatin gene expression was similar in all groups. Conclusion Loss of ovarian function results in increased loss of skeletal musclerelated ubiquitin ligases atrogin-1 and MuRF-1 in arthritic rats.

Objetivo Foram estudados os efeitos da perda da função ovariana (ovariectomia) sobre músculo esquelético e os níveis de RNAm de IGF-1, atrogina-1, MuRF-1, e de miostatina em modelo experimental de artrite reumatóide em ratos. Métodos 24 ratos Wistar (9 semanas, 195,3±17,4 gramas) foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos: controle (CT-Sham, n = 6); artrite reumatóide (RA, n = 6); ovariectomia sem artrite reumatóide (OV; n = 6); ovariectomia com artrite reumatóide (RAOV; n = 6). Os procedimentos da ovariectomia (OV e RAOV) ou simulação da ovariectomia (CT-Shamou RA) foramrealizados aomesmo tempo, quinze dias antes da indução da artrite reumatóide. Os grupos RA e RAOV foramimunizados e, em seguida, foram injetados com Met-BSA na articulação tibiotársica. Após 15 dias das injeções intra-articulares, os animais foram eutanasiados. Foram avaliadas as manifestações externas da artrite reumatóide (perimetria articular), bem como o peso dos animais e a ingestão de alimentos ao longo do estudo. Além disso, as áreas de secção transversa (CSA) do músculo gastrocnêmio foram analisadas em 200 fibras (método H & E). No músculo gastrocnêmio, a expressão de RNAm foi analisada por PCR quantitativo em tempo real, seguido pelo método Livak (ΔΔCT). Resultados A artrite reumatoide reduziu a CSA das fibras do músculo gastrocnêmio. O grupo RAOV mostrou uma CSA menor nas fibras do músculo gastrocnêmio em comparação com os grupos RA e CT-Sham. O RNAm do IGF-1 do músculo esquelético aumentou nos ratos artríticos e ovariectomizados. O RNAm do IGF-1 foi maior nos grupos OV do que nos grupos RA e RAOV. A expressão de antrogina-1 também aumentou no músculo gastrocnêmio dos ratos artríticos e ovariectomizados. No entanto, o aumento do RNAm da atrogina-1 foi maior no grupo RAOV do que nos grupos RA e OV. O RNAm da MuRF-1 aumentou nos grupos OV e RAOV, mas não nos grupos RA e CT-Sham. Porém, o grupo RAOV apresentou maior expressão gênica de MuRF-1 do que o grupo OV. A expressão do gene da miostatina foi semelhante em todos os grupos. Conclusão A perda de função ovariana resulta em perda de músculo esquelético associado às ubiquitina-ligases atrogina-1 e MuRF-1 em ratos artríticos.

Human papillomavirus types 16 and 18 and the prognosis of patients with stage I cervical cancer

OBJECTIVE: This study sought to evaluate the prevalence of human papillomavirus (HPV) types 16 and 18 in women with clinical stage IB cervical cancer treated by radical hysterectomy with pelvic lymphadenectomy as well as to establish a correlation between HPV type and cancer prognosis. METHODS: A single-center cohort study was conducted with 86 patients who had undergone radical hysterectomy for stage I cervical cancer. Prognostic factors and the presence of HPV 16 and 18 were analyzed using a polymerase chain reaction assay. A univariate analysis using Kaplan-Meier curves was conducted to estimate survival. RESULTS: The prevalence of HPV 16 in the study group was 65.3%, and the prevalence of HPV 18 was 33.3%. The prevalence of infection with both viruses was 26.9%. Overall survival at 5 years was 91% among women with HPV 18 and 96% among those without this virus type (p = 0.133). Among the women with HPV 16, the overall survival was 94%, whereas this rate was 96% among those without this virus type (p = 0.663). Disease-free survival was unaffected by the presence of HPV type 16 or 18. CONCLUSION: In the present study, despite the high prevalence of HPV types 16 and 18, the presence of these virus types did not affect the prognosis of patients with stage I cervical cancer who underwent radical hysterectomy. .

Prevention of cervical cancer in women with ASCUS in the Brazilian Unified National Health System: cost-effectiveness of the molecular biology method for HPV detection / Prevenção de câncer de colo uterino em pacientes com ASCUS no Sistema Único de Saúde: custo-efetividade de método de biologia molecular para HPV

This study aimed to assess the performance of PCR as a means of detecting HPV 16/18 compared to the single probe-based PCR for detecting high-risk HPV, and evaluate these methods for detecting cervical intraepithelial neoplasia (CIN) in follow-ups for ASCUS testing. It also compares the costs of cytology, PCR methods, colposcopy and biopsy in the Brazilian Unified National Health System. Of the 81 patients with ASCUS, 41 (50.6%) tested positive for HPV 16/18 in PCR testing and 47 (58.02%) tested positive for high-risk HPV with single probe-based PCR testing. The negative predictive value was 93.75% for HPV 16/18 PCR and 100% for single probe-based PCR in cases that progressed to high-grade CIN. The annual costs of patient referral were the following: R$2,144.52 for referral of patients with ASCUS cytology for colposcopy; R$6,307.44 for referral of patients with ASCUS cytology and PCR positive for HPV 16/18 or colposcopy; R$3,691.80 for referral of patients with ASCUS cytology with single probe-based PCR positive for high-risk HPV. Therefore, cost per user can be reduced by performing single probe-based PCR for high-risk HPV on patients with ASCUS.

Os objetivos deste estudo foram avaliar o desempenho do PCR para detecção de HPV 16/18 versus PCR sonda única para a detecção de HPV de alto risco, avaliar estes métodos na detecção de neoplasia intraepitelial cervical (NIC) no seguimento de ASCUS, e comparar os custos de citologia, métodos de PCR, colposcopia e biópsia no Sistema Único de Saúde. Das 81 pacientes com ASCUS, 41 (50,6%) foram positivas para o HPV 16/18 PCR, e 47 (58,02%) foram positivas para PCR sonda única para HPV de alto risco. O valor preditivo negativo foi de 93,75% para HPV 16/18 PCR e 100% para PCR sonda única em casos que evoluíram para NIC de alto grau. Os custos anuais encaminhando todas as pacientes com ASCUS para a colposcopia, encaminhando à colposcopia as pacientes com ASCUS e PCR positivo para HPV 16/18 e encaminhando à colposcopia aquelas pacientes com ASCUS e PCR sonda única para HPV de alto risco positivo foram de R$2.144,52, R$6.307,44 e R$3.691,80, respectivamente. Considerando eventual redução dos custos para utilização em grandes quantidades, este método poderia ser realizado em ASCUS.

Metilação aberrante de DNA, câncer cervical e HPV / Aberrant DNA methylation, cervical cancer and HPV

O diagnóstico laboratorial de metilação de DNA pode ser uma ferramenta fundamental para auxiliar no rastreio do câncer cervical. Os genes de metilação contribuem para o prognóstico de tumores do câncer cervical. O objetivo deste estudo foi identificar a frequência dos genes metilados mais frequentes no câncer cervical e a correlação da hipermetilação com a infecção por papilomavírus humano (HPV). Realizou-se uma revisão bibliográfica de publicações entre 2002 a 2012, utilizando-se a base de dados da PubMed. Os artigos selecionados revelaram que os genes metilados mais frequentes no câncer cervical são: CDH1, DAPK, RARβ, HIC1, DKK3, SFRP2, SOX17, WIF1, MGMT, hTERT e RASSF1A. Não houve correlação estatística significativa entre a positividade do HPV e a hipermetilação. Esses dados sugerem que os genes metilados mais frequentes no câncer cervical podem influenciar no início da progressão da doença. Acredita-se que o conhecimento sobre metilação de DNA no câncer cervical possa ser útil para prever as neoplasias do colo do útero, evitar a progressão da doença e servir como alvos de tratamento.

Laboratory diagnosis of DNA methylation may be a fundamental tool to help cervical cancer screening. Methylated genes contribute to the prognosis of cervical tumors. The objective of this study was to identify the frequency of the methylated genes most commonly found in cervical cancer and the correlation between hypermethylation and human papillomavirus (HPV) infection. A literature review was conducted of papers published between 2002 and 2012 using the PubMed database. The selected papers showed that the most common methylated genes in cervical cancer are: CDH1, DAPK, RARβ, HIC1, DKK3, SFRP2, SOX17, WIF1, MGMT, hTERT and RASSF1A. No statistically significant correlation was found between HPV positivity and hypermethylation. These data suggest that the methylated genes most commonly found in cervical cancer may exert an effect on the onset of disease. It is believed that the knowledge about DNA methylation in cervical cancer may be useful for predicting uterine neoplasias, avoid disease progression and may reveal possible targets for treatment.

Metilação genética, neoplasia intraepitelial cervical e câncer do colo uterino / Genetics methylation, cervical intraepithelial neoplasia and cervical cancer

O câncer de colo uterino é uma importante causa de morte entre as mulheres em países subdesenvolvidos. A infecção persistente pelo papilomavírus humano (HPV) oncogênico e o comprometimento da resposta imune são fatores de risco para o desenvolvimento da neoplasia intraepitelial cervical (NIC) e sua progressão para o câncer cervical invasivo. O diagnóstico precoce e o tratamento das lesões precursoras do câncer são de grande importância. Estudos epigenéticos estão sendo realizados com o objetivo de avaliar sua influencia nos processos de oncogênese, visto que alterações epigenéticas estão presentes em quase todos os tumores. A metilação de DNA e a acetilação de histonas são as duas mudanças epigenéticas mais estudadas. O melhor entendimento do perfil epigenético na neoplasia intraepitelial cervical e no câncer cervical invasor pode ser utilizado no diagnóstico e prognóstico deste câncer. O objetivo desta revisão consistiu em entender as mudanças epigenéticas encontradas até o momento nas pacientes com NIC e câncer de colo uterino. Foi realizada revisão da literatura de estudos indexados em banco de dados, como PubMed e LILACS. Verificou-se que, até o presente momento, não há um marcador de metilação que tenha o desempenho adequado para servir como indicador para as lesões precursoras do câncer, ou mesmo para o carcinoma cervical.

The cervical cancer is a major cause of death among women in developing countries. Persistent infection by human papillomavirus (HPV) and oncogenic involvement of the immune response are risk factors for the development of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) and its progression to invasive cervical cancer. Early diagnosis and treatment of cancer precursor lesions are of great importance. Epigenetic studies are being conducted to evaluate its influence in the process of oncogenesis, since epigenetic alterations are present in almost all tumors. DNA methylation and histone acetylation are the two most studied epigenetic changes. An improved understanding of the epigenetic profile in CIN and invasive cervical cancer can be used in the diagnosis and prognosis of this cancer. The aim of this review was to understand the epigenetic changes found to date in patients with CIN and cervical cancer. We performed a literature review of studies indexed in databases such as PubMed and LILACS. It was found that, to our knowledge, there is no methylation marker with an adequate performance to serve as an indicator for cancer precursor lesions, or even for cervical carcinoma.

Avaliação de citocinas em secreção endocervical de mulheres com candidíase, tricomoníase ou vaginite bacteriana / Evaluation of cytokines in endocervical secretions of women with candidiasis, trichomoniasis or bacterial vaginitis

Os processos infecciosos na vagina devidos a micro-organismos são muito comuns. As vulvovaginites são, em grande parte, causadas por protozoários, leveduras, bactérias e/ou vírus. Sua erradicação ou contenção é normalmente mediada pelas citocinas da mucosa vaginal. O presente estudo teve a intenção de verificar a concentração de citocinas IL-2, IL-6, IL-10, IL-12, IFN-gama, TNF-alfa e suas relações com alguns dos agentes das infecções. Foram incluídas 173 mulheres sexualmente ativas com idade entre 16 e 48 anos, média de 31,4 mais ou menos 6,5 anos, as quais foram divididas nos seguintes grupos: controle, com candidíase, com tricomoníase e com vaginite bacteriana. As amostras foram submetidas ao cultivo e, posteriormente, à identificação do micro-organismo. Em seguida, foi feita a dosagem de citocinas da secreção endocervical por meio do teste ELISA. Os dados foram submetidos à análise estatística, calculando-se a mediana e o intervalo interquartil, e ao teste Mann-Whitney. Os resultados foram considerados significantes com p menor que 0,05. Verificou-se uma maior concentração de diferentes citocinas no trato genital inferior de mulheres com candidíase, tricomoníase, vaginite bacteriana do que naquelas com microbiota normal...

Resposta imune ao HPV e as neoplasias intra-epiteliais cervicais em mulheres infectadas e não infectadas pelo HIV: perfil de citocinas / Immune response to HPV and cervical intraepithelial neoplasia among HIV infected and non-infected women: Cytokines profile

A infecção pelo papilomavirus humano (HPV) está relacionada com o desenvolvimento do carcinoma cervical. A prevalência da infecção pelo HPV em pacientes portadoras do vírus da Imunodeficiência Humana (HIV) é maior que na população geral. Vários mecanismos são sugeridos para explicar essa prevalência aumentada em pacientes portadoras do HIV, sendo que a modulação da resposta imune parece desempenhar papel importante. O sistema imune é dividido didaticamente em dois tipos: imunidade inata e imunidade adquirida. Essa, por sua vez, é dividida em imunidade humoral e celular. As células TCD4 possuem papel crucial na resposta celular e são dividas em padrões. Os principais e mais conhecidos são em Th1 e Th2 de acordo com o perfil de citocinas sintetizadas. Em pacientes portadoras do HPV existe tendência de mudança do perfil Th1 para o perfil Th 2 à medida que a lesão agrava. Em pacientes co-infectadas HPV/HIV a taxa de clareamento da infecção pelo HPV é menor que em pacientes não infectadas pelo HIV. O melhor entendimento da resposta imune local poderia ajudar a compreender qual paciente tem maior risco de progressão da doença

The human papillomavirus (HPV) is related to the development of cervical cancer. The prevalence of HPV infection in patients infected with human immunodeficiency virus (HIV) is higher than in the general population. Several mechanisms are suggested to explain this increased prevalence in patients with HIV, and the modulation of the immune response seems to play an important role. The immune system is didactically divided into two types: innate and acquired immunity. The latter is further divided into humoral and cell mediated immunity. CD4 T cells, which have a crucial role in cell mediated response, are functionally being divided into patterns, the main and best known are Th1 and Th2 according to the cytokine profile that is produced. In patients with HPV there is a tendency to shift from th1 to th2 cytokine as the lesion gets worse. Among HPV/HIV coinfected patients, the clearence rate of HPV infection is lower than in patients not infected with HIV. It is argued that a better understanding of the local immune response could assist in the detection of patients who are at a greater risk of disease progression

Resposta imune celular ao papilomavírus humano em mulheres infectadas e não infectadas pelo vírus da imunodeficiência humana / Cellular immune response to human papillomavirus among women infected and noninfected with human immunodeficiency virus

Em razão da alta prevalência da infecção pelo papilomavírus humano (HPV) entre as mulheres, particularmente entre as jovens sexualmente ativas, podendo causar a neoplasia intraepitelial cervical (NIC) e o câncer cervical, é importante abordar os vários fatores associados a essa interação vírus-hospedeiro, e um dos fatores mais importantes é a resposta imune do hospedeiro. Esta, tanto sistêmica quanto local, tem papel crucial para determinar o curso da infecção. Nos casos de infecção persistente, há maior probabilidade de progressão para as NICs e/ou câncer invasor. Esta revisão tem como objetivo avaliar o papel da resposta imune local, em especial a resposta do tipo celular, no curso da infecção pelo HPV e na evolução ou regressão das lesões cervicais, na tentativa de melhor compreensão das diferentes formas de comportamento dessas lesões HPV induzidas, inclusive na associação com o vírus da imunodeficiência humana (HIV).

Given the high prevalence of human papillomavirus infection among women, particularly young sexually active women, and its role in the cause of cervical intraepithelial neoplasia and cervical cancer, it is important to address the several factors associated with this viral-host interaction. Among these factors, the most important is the host immune response. Both systemic and local response have crucial roles in determining the course of infection. In cases of persistent infection, there is a greater likelihood of progression to intraepithelial neoplasia and/or invasive cancer. The objective of this review is to evaluate the role of local immune response, particularly the response of cell type in the course of HPV infection as well as in the progression or regression of cervical lesions in order to better understand the behavior of different forms of HPV induced lesions, including its association with the human immunodeficiency virus.

Local lymphocytes and nitric oxide synthase in the uterine cervical stroma of patients with grade III cervical intraepithelial neoplasia

OBJECTIVES: Precancerous and cancerous cells can trigger an immune response that may limit tumor development and can be used as a prognostic marker. The aims of the present study were to quantify the presence of B and T lymphocytes, macrophages and cells expressing inducible nitric oxide synthase (iNOS) in the cervical stroma of women with grade III cervical intraepithelial neoplasia (CIN III) or in the intratumoral and peritumoral tissue of women with stage I invasive carcinoma. METHODS: Cervical tissue specimens were obtained from 60 women (20 each from control tissues, CIN III and invasive carcinomas). The average ages in the control, CIN III and invasive groups were 43.9 (± 4.3), 35.5 (± 9.5), and 50 (± 11.2) years, respectively. The specimens were immunohistochemically labeled with antibodies to identify T lymphocytes (CD3), cytotoxic lymphocytes (CD8), B lymphocytes (CD20), macrophages (CD68) and iNOS. We evaluated the markers in the stroma above the squamocolumnar junction (control), at the intraepithelial lesion (CIN cases), and in the nfiltrating tumor. Two independent observers performed the immunohistochemical analysis. RESULTS: T lymphocytes, B lymphocytes, macrophages and iNOS were present more frequently (P<0.05) in the stroma of peritumoral invasive tumors compared to the controls and intratumoral invasive cancer samples. CD3+ and CD20+ lymphocytes were present more frequently in CIN III patients compared to samples from patients with intratumoral invasive cancer (P<0.05). CONCLUSION: High numbers of T and B lymphocytes, macrophages and iNOS-expressing cells in the peritumoral stroma of the invasive tumors were observed. Cell migration appeared to be proportional to the progression of the lesion.

Resposta imune do aparelho reprodutor / Immune response of the female genital tract

O aparelho reprodutor feminino possui características únicas do ponto de vista imunológico, pois, ao mesmo tempo em que deve ter tolerância ao esperma alogênico e ao concepto (semi-alogênico), ele tem eficiência para reagir contra microrganismos, principalmente aqueles patógenos transmitidos sexualmente. O aparelho reprodutor feminino também apresenta diferentes aspectos imunológicos de acordo com o local, pois o útero tem resposta imune predominantemente celular, enquanto a vagina e a ectocérvice possui preferencialmente uma resposta imune humoral. Esta revisão tem por objetivo discutir os principais aspcectos da resposta imune do aparelho reprodutor feminino.

Resposta imune nas lesões intra-epiteliais do colo uterino / Immune response to the cervical intraepithelial lesions

A resposta imune às neoplasias intra-epiteliais cervicais é muito peculiar, visto que se trata de um processo iniciado por um vírus e pelo próprio microambiente no qual a lesão se inicia - o aparelho reprodutor feminino. Nesta revisão, serão discutidos os principais aspectos da resposta imune envolvidos na infecção pelo HPV e nas neoplasias intra-epiteliais cervicais, além de tentar-se dar uma visão para melhor entender os futuros tratamentos que estão sendo propostos para as neoplasias causadas por esta infecçao.

Utilization of human papillomavirus testing for cervical cancer prevention in a university hospital

This study aimed to evaluate the performance and cost of using polymerase chain reaction (PCR) and hybrid capture in the detection of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) in patients with cytological abnormalities (ASCUS/low-grade squamous intraepithelial lesion - LSIL), and the feasibility of implementing these methods in Brazil's Unified National Health System (SUS). Colposcopy gave a negative predictive value of 92.86 percent and efficiency of 87.8 percent for diagnosing CIN. The sensitivity of PCR and hybrid capture for detecting CIN was 83.33 percent and 66.67 percent, respectively, and the negative predictive value for diagnosing CIN2/CIN3 was 100 percent and 94.74 percent, respectively. The annual cost for 80 patients was lower when all patients with ASCUS/LSIL were referred for colposcopy than when HPV testing was performed and those with positive results were referred for colposcopy. Therefore, at present, it is financially unfeasible for the National Health System to implement HPV testing to screen patients with cytological abnormalities (ASCUS/LSIL). However, considering that large-scale use might make such methods cheaper, PCR should be the chosen method, since it is less expensive, more sensitive, and has a high negative predictive value.

O trabalho objetivou avaliar o desempenho e o custo do PCR e captura híbrida na detecção de neoplasia intra-epitelial cervical (NIC) em pacientes com anormalidades citológicas (ASCUS/lesões de baixo grau - LBG), e a viabilidade da implantação destes métodos no serviço público de saúde. Observou-se valor preditivo negativo de 92,86 por cento e eficiência de 87,8 por cento da colposcopia para diagnóstico de NIC. A sensibilidade do PCR e captura híbrida na detecção de NIC foi de 83,33 por cento e 66,67 por cento, respectivamente. O valor preditivo negativo no diagnóstico de NICII e III do PCR e captura híbrida foi de 100 por cento e 94,74 por cento, respectivamente. O custo anual das oitenta pacientes foi menor encaminhando-se todas as pacientes com ASCUS/ LBG à colposcopia do que se fossem realizados testes biomoleculares e encaminhando-se aquelas com resultados positivos à colposcopia. Portanto, por enquanto, é inviável financeiramente para o Sistema Unico de Saúde a implantação de métodos de biologia molecular para pacientes com ASCUS e LBG à citologia cérvico-vaginal, mas considerando que o uso em grande escala poderia torná-los mais baratos, o PCR deveria ser o método escolhido, por ter menor custo, alto valor preditivo negativo e melhor sensibilidade.

Resposta imune celular no câncer de mama / Cellular immune response in breast cancer

O câncer de mama é uma doença de grande impacto social. Seu tratamento e prognóstico dependem de variáveis, tais como: tamanho tumoral, grau histológico, estado linfonodal, entre outras. A resposta imune do hospedeiro tem o objetivo de destruir as células tumorais, porém vários fatores atuam levando ao escape dessas células neoplásicas. O grau de infiltração de linfócitos poderia ser um dos fatores implicados no prognóstico. Este artigo tem como objetivo a revisão do papel da resposta imunológica no câncer de mama.

Breast cancer is a disease with great social repercussions. The treatment and the prognosis depend on serial factors, as: tumoral size, histologycal grade and lymph nodes status. The host immunitary response aims to remove neoplasic cells, but some interferent factors might allow embolization and metastatization. It should be postulated that the lymphocit function could be act as a prognostic. This review focus the role of the immune response en breast cancer.

Prevenção do câncer de colo uterino: testes biomoleculares para HPV / Cervical cancer prevention: HPV DNA testing

O câncer de colo uterino é a terceira neoplasia maligna mais comum em mulheres no Brasil. Geralmente, o rastreamento tem sido feito pela citologia cérvico-vaginal, e as pacientes com alterações citológicas são encaminhadas para a colposcopia. A infecção do colo uterino por HPV (papilomavírus humano) de alto risco está associada ao desenvolvimento do câncer de colo uterino e lesões precursoras. Apesar do impacto da citologia oncótica cérvico-vaginal na redução da incidência desse câncer no mundo, esse método possui muitas limitações. Recentemente, o desenvolvimento de testes biomoleculares para a detecção de infecção por HPV do colo uterino tem sido uma alternativa ou um método adjunto à citologia para a detecção de NIC (neoplasia intra-epitelial cervical). Muitos estudos mostram a utilidade clínica dos testes biomoleculares para HPV: no rastreamento primário, como adjunto da citologia de ASCUS (células escamosas atípicas de significado indeterminado) ou LIBG (lesão intra-epitelial de baixo grau) e no seguimento pós-tratamento.